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遠(yuǎn)慕實(shí)驗(yàn): 谷胱甘肽含量測定的常見原理
點(diǎn)擊次數(shù):2805 更新時(shí)間:2020-06-15

說起谷胱甘肽(glutathioneGSH)可能很多童鞋們都接觸過,不過對與它的生理意義估計(jì)大家還不是*了解,我們給大家簡單介紹下:


一、啥是谷胱甘肽?


谷胱甘肽

谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸結(jié)合,含有巰基的的三肽,具有抗氧化作用和整合解毒作用。半胱氨酸上的巰基為谷胱甘肽活性基團(tuán)(故谷胱甘肽常簡寫為G-SH),易與某些藥物(如撲熱息痛)、毒素(如自由基、dian乙酸、芥子氣,鉛、汞、砷等重金屬)等結(jié)合,而具有整合解毒作用。故谷胱甘肽(尤其是肝細(xì)胞內(nèi)的谷胱甘肽)能參與生物轉(zhuǎn)化作用,從而把機(jī)體內(nèi)有害的毒物轉(zhuǎn)化為無害的物質(zhì),排泄出體外。谷胱甘肽還能幫助保持正常的免疫系統(tǒng)的功能。


谷胱甘肽廣泛存在于動(dòng)、植物中,在生物體內(nèi)有著重要的作用。在面包酵母、小麥胚芽和動(dòng)物肝臟中的含量很高,達(dá)100~1000mg/100g,在人體血液中含26~34mg/100g,雞血中含58~73mg/100g,豬血中含10~15mg/100g,在西紅柿、菠蘿、黃瓜中含量也較高(12~33mg/100g),而在甘薯、綠豆芽、洋蔥、香菇中含量較低(0.06~0.7mg/100g)。


谷胱甘肽有還原型(G-SH)和氧化型(G-S-S-G)兩種形式,在生理?xiàng)l件下以還原型谷胱甘肽占絕大多數(shù)。谷胱甘肽還原酶催化兩型間的互變。該酶的輔酶為磷酸糖旁路代謝提供的NADPH。


二、谷胱甘肽的生理功能


機(jī)體新陳代代謝產(chǎn)生的過多自由基會(huì)損傷生物膜,侵襲生命大分子,加快機(jī)體衰老,并誘發(fā)腫瘤或動(dòng)脈粥樣硬化的產(chǎn)生。谷胱甘肽在人體內(nèi)的生化防御體系起重要作用,具有多方面的生理功能。它的主要生理作用是能夠清除掉人體內(nèi)的自由基,做為體內(nèi)一種重要的抗氧化劑,保護(hù)許多蛋白質(zhì)和酶等分子中的巰基。GSH的結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)活潑的巰基-SH,易被氧化脫氫,這一特異結(jié)構(gòu)使其成為體內(nèi)主要的自由基清除劑。


例如當(dāng)細(xì)胞內(nèi)生成少量H2O2時(shí),GSH在谷胱甘肽過氧化物酶的作用下,把H2O2還原成H2O,其自身被氧化為GSSG,GSSG由存在于肝臟和紅細(xì)胞中的谷胱甘肽還原酶作用下,接受H還原成GSH,使體內(nèi)自由基的清除反應(yīng)能夠持續(xù)進(jìn)行。


谷胱甘肽不僅能消除人體自由基,還可以提高人體免疫力。谷胱甘肽維護(hù)健康,抗衰老,還可以保護(hù)血紅蛋白不受*氧化、自由基等氧化從而使它持續(xù)正常發(fā)揮運(yùn)輸氧的能力。紅細(xì)胞中部分血紅蛋白在*等氧化劑的作用下,其中二價(jià)鐵氧化為三價(jià)鐵,使血紅蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)楦哞F血紅蛋白,從而失去了帶氧能力。還原型谷胱甘肽既能直接與*等氧化劑結(jié)合,生成水和氧化型谷胱甘肽,也能夠?qū)⒏哞F血紅蛋白還原為血紅蛋白。人體紅細(xì)胞中谷胱甘肽的含量很多,這對保護(hù)紅細(xì)胞膜上蛋白質(zhì)的巰基處于還原狀態(tài),防止溶血具有重要意義。


谷胱甘肽保護(hù)酶分子中-SH基,有利于酶活性的發(fā)揮,并且能恢復(fù)已被破壞的酶分子中-SH基的活性功能,使酶重新恢復(fù)活性。谷胱甘肽還可以抑制乙醇侵害肝臟所產(chǎn)生的脂肪肝。


谷胱甘肽對于放射線、放射性藥物所引起的白細(xì)胞減少等癥狀,有強(qiáng)有力的保護(hù)作用。谷胱甘肽能與進(jìn)入人體的有毒化合物、重金屬離子或致癌物質(zhì)等相結(jié)合,并促進(jìn)其排出體外,起到中和解毒作用。


三、谷胱甘肽的廣泛應(yīng)用


谷胱甘肽具有廣譜解毒作用,不僅可用于藥物,更可作為功能性食品的基料,在延緩衰老、增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤等功能性食品廣泛應(yīng)用。


    臨床藥物

已人工研制開發(fā)出了谷胱甘肽藥物,廣泛應(yīng)用于臨床,除利用其巰基以螯合重金屬、氟化物、芥子氣等毒素中毒外,還用在肝炎、溶血性疾病以及角膜炎、白內(nèi)障和視網(wǎng)膜疾病等,作為治療或輔助治療的藥物。近年來,西方科學(xué)家,尤其是日本學(xué)者發(fā)現(xiàn)谷胱甘肽具有抑制艾滋病毒的功能。


xin研究還表明,GSH能夠糾正乙酰膽堿、膽堿酯酶的不平衡,起到抗過敏作用,還可防止皮膚老化及色素沉著,減少黑色素的形成,改善皮膚抗氧化能力并使皮膚產(chǎn)生光澤,另外,GSH在治療眼角膜病及改善性功能方面也有很好作用。


    與維生素C聯(lián)用

另外,維生素C也是體內(nèi)一種重要的抗氧化劑。由于維生素C能可逆地加氫或脫氫,故維生素C在體內(nèi)許多氧化還原反應(yīng)中有重要作用。例如,許多酶的活性基團(tuán)是巰基(-SH),維生素C能夠維持-SH處于還原狀態(tài)而保持酶的活性;維生素C可以使氧化型谷胱甘肽轉(zhuǎn)變?yōu)檫€原型谷胱甘肽(GSH),使機(jī)體代謝產(chǎn)生的*(H2O2)還原;維生素C還可保護(hù)維生素A、E及某些B族維生素免受氧化。因此,運(yùn)用谷胱甘肽時(shí),與維生素C并用,能夠提高其功效。


四、谷胱甘肽含量測定的常見原理


GSH是細(xì)胞內(nèi)主要的抗氧化巰基物質(zhì),在抗氧化、蛋白質(zhì)巰基保護(hù)和氨基酸跨膜運(yùn)輸?shù)戎芯哂兄匾饔谩_€原型與氧化型比值(GSH/GSSG)是細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的主要?jiǎng)討B(tài)指標(biāo)。因此,測定細(xì)胞內(nèi)GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài),也是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)的主要指標(biāo)之一。


    谷胱甘肽有還原型(G-SH)測定原理:

谷胱甘肽能和 5,5’二硫代-雙-(2-硝基苯甲酸) (5,5’-dithiobis-2-nitrobenoicacid,DTNB)反應(yīng)產(chǎn)生 2-硝基-5-巰基苯甲 酸和谷胱甘肽二硫化物(GSSG)。2-硝基-5-巰基苯甲酸為黃色產(chǎn)物,在波長 412nm 處具有大光 吸收,其吸光度與GSH含量成正比。


    氧化型谷胱甘肽(GSSG)測定原理:

氧化型谷胱甘肽(GSSG)是谷胱甘肽(GSH)的氧化形式,又稱為二硫代谷胱甘肽,是兩分子的谷胱甘肽氧化而成。GSSG 會(huì)被谷胱甘肽還原酶還原成 GSH,因此機(jī)體中大多數(shù)是以還原型式存在。


通過 2-乙烯吡啶抑制樣品中原有的還原型谷胱甘肽,然后利用谷胱甘肽還原酶將GSSG 還原為GSH,再利用谷胱甘肽能和 5,5’-二硫代-雙-(2-硝基苯甲酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,DTNB)反應(yīng)產(chǎn)生 2-硝基-5-巰基苯甲酸,2-硝基-5-巰基苯甲酸在波長 412nm 處具有大光吸收的特點(diǎn),借此測定氧化型谷胱甘肽的含量。

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